菌絲體成熟后,由白色逐漸轉(zhuǎn)為桔黃色,此時,室內(nèi)應(yīng)增加光照白,白天利用自然散射光,保持200勒克斯,晚間可利用日光燈作光源,每天應(yīng)不少于10h光照,以促使菌絲體轉(zhuǎn)色和刺激原基形成。待料面突起,并形成小米粒狀原基時,要適當(dāng)通風(fēng),補(bǔ)充新鮮空氣,保護(hù)室內(nèi)溫度18℃-22℃,并提高空氣相對溫度至80%-85%。如濕度太大,易使培養(yǎng)基提早失水而影響產(chǎn)量。蛹蟲草有較強(qiáng)的趨光性,因此在子實(shí)體形成后,應(yīng)根據(jù)情況適當(dāng)調(diào)整培養(yǎng)瓶與光源的相對方向,或調(diào)整室內(nèi)光源方向,以保證子實(shí)體的正常生長形態(tài),從而提高產(chǎn)量,形成橘黃色或橘紅色的頂部略膨大的呈棒狀的子座(子實(shí)體)。待子實(shí)體不再生長,其頂端出現(xiàn)許多小刺時,表明已成熟。采收時,用無菌鑷子鉗出子實(shí)體,然后再加少許營養(yǎng)液,重新包扎好瓶口,繼續(xù)培養(yǎng),20d左右,又可長出第二批子座。采收下的子實(shí)體晾干或低溫烘干后出售
蟲草菌絲的最適生長溫度為20~25°C。在進(jìn)行菌絲發(fā)酵時碳源以蛋白胨為最優(yōu),采用1∶2或1∶3的碳氮比較為合適。
發(fā)酵最佳培養(yǎng)基組成是:5%大米粉、1.5%豆餅粉、1.5%麥芽粉、0.1%KH2PO4,0.05%MgSO4·7H2O。
影響蛹蟲草菌胞外多糖產(chǎn)量的實(shí)驗(yàn)因子顯著性大小的排列順序?yàn)椋禾鸩颂?gt;;酵母浸出粉>KNO3>MgSO4·7H2O>FeSO4>K2HPO4。胞外多糖最佳發(fā)酵工藝參數(shù):初始pH值為7,500ml三角瓶中培養(yǎng)基裝液量為100ml,接種量6%,溫度28°C。周期為96h。
培養(yǎng)基配方為:玉米粉4%,黃豆粉0.6%,酵母粉0.3%,K2HPO40.05%,MgSO40.05%,接種量3%,pH5.5。認(rèn)為碳源因子對胞外多糖的產(chǎn)生影響顯著。
蛹蟲草發(fā)酵的適宜培養(yǎng)基組成為:蔗糖5.0%,玉米漿3.0%,酵母膏0.5%,MgSO4·7H2O0.05%,KH2PO40.05%,認(rèn)為蔗糖為碳源最好,以酵母膏為氮源,菌體產(chǎn)量最高。
蛹蟲草菌絲的生長可以利用多種碳源和氮源,在以紅糖碳源、奶粉為氮源的液體培養(yǎng)基中生長最佳,且碳源/氮源合適的比例為2.0~2.5/1.0,適宜PH為5.0~6.5。
培養(yǎng)基成分確定為蛋白胨1.5%,MgSO40.05%,KH2PO40.15%,VB15mg/L,2,4D2mg/L。在相同條件下,優(yōu)化培養(yǎng)基比原來培養(yǎng)基的發(fā)酵得率提高了4.5%,研究初步得到蛹蟲草液體培養(yǎng)條件和生長動力學(xué),為工業(yè)化生產(chǎn)提供了一定的理論依據(jù)。
培養(yǎng)基配比可將該菌株的蟲草素含量提高到1.21%,比用Czapek培養(yǎng)基提高8.1倍。柴建萍等通過實(shí)驗(yàn)得出玉米粉為最優(yōu)碳源,蠶蛹粉為最優(yōu)氮源,MgSO4為最優(yōu)無機(jī)鹽。液體發(fā)酵最佳培養(yǎng)基配方為:玉米粉(20g/1000ml),蠶蛹粉(5g/1000ml),硫酸鎂(0.5g/1000ml)。